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随着研究的一直深入，，，现代神经科学需要关注大宗差别种类的神经元或胶质细胞，，，举行细腻研究，，，除了特异性启动子的应用外，，，还可以借助多种Cre小鼠模子配合DIO病毒战略或flox小鼠战略以实现特异性操作神经元的目的。 。。
Cre-LoxP系统
泉源于噬菌体P1的Cre/loxP系统主要包括2个主要组成部分：一个是loxP位点，，，另一个就是可以对loxP位点举行识别的Cre酶，，，使两个loxP位点间爆发基因重组，，，实现对目的基因删除、翻转、易位和序列交流。 。。在神经科学领域，，，此手艺可以用于对神经环路的特异性标记、特异细胞类型中内源基因的功效研究及构建小鼠模子等。 。。(更多Cre系统相关内容，，，可参考【知识分享】一半海水、一半火焰，，，分子表达操控中高频泛起的Cre、Flp、Dre等重组酶系统怎样事情)
Cre鼠战略
使用基因敲入手段，，，借助CRISPR/Cas9手艺，，，将Cre重组酶定点插入到小鼠基因组中，，，获得可特异性在某类神经元中表达Cre的工具鼠，，，从而可以配合AAV-DIO病毒载体，，，做到精准操控神经元的目的，，，亦可以和多种Flox鼠搭配使用，，，研究差别基因的功效。 。。
以Thy1-iCre工具鼠为例构建战略
锥体细胞是大脑皮层内最主要的兴奋性神经元，，，所有的皮层信息传出都是由锥体神经元携带的，，，加入条件性恐惧反射（fear conditioning）、学习影象（learning and memory）、感受和运动（sensorimotor process）信息的处置惩罚等多种心理历程，，，在神经退行性疾病动物造模及神经损伤研究中均施展主要作用。 。。
Thy1是锥体神经元的特异性启动子，，，在前脑、海马、杏仁核、丘脑及视网膜等区域均有富厚的表达，，， Thy1-cre鼠配合重组AAV病毒可在以上脑区实现细胞特异性标记、光遗传学和化学遗传学使用、在体钙成像纪录，，，或者组织特异性的基因编辑。 。。
Thy1-Cre鼠应用战略
1、Thy1-Cre鼠配合AAV-DIO- DREADD病毒载体，，，使用杏仁核BLA区Thy1阳性细胞改变恐惧影象的消退和维持
在杏仁核中，，，Thy1阳性的细胞集中漫衍在基底外侧部（basolateral），，，而Thy1阴性的细胞则普遍漫衍于整个杏仁核。 。。这两类神经元在恐惧影象的形成、消退（extinction）和消退维持（retention）中划分起到了差别的作用。 。。其中Thy1阳性标记的细胞体现出对恐惧抑制或者被称为“恐惧-关（Fear-Off）”神经元的特征[1]。 。。
在Thy1-Cre鼠BLA注射兴奋性化学遗传学病毒AAV-DIO-Gs-DREADD-IRES-mCherry，，，同时以AAV-CaMKII-eYFP作比照，，，可见Gs- DREADD的表达局限在BLA，，，可是比照病毒的荧光则普遍地漫衍在整个杏仁核。 。。在动物举行恐惧消退和消退维持实验前30 min于腹腔注射CNO。 。。效果显示，，，在恐惧消退历程中，，，使用化学遗传手段增强BLA Thy1神经元的兴奋水平虽然使动物的恐惧行为泛起下降，，，但相比比照动物这一转变在统计上并未体现出显著。 。。然而在恐惧消退维持测试中增强BLA Thy1神经元的兴奋水平可以使动物的恐惧行为显著下降，，，这提醒增添BLA Thy1阳性神经元的运动有助于恐惧影象消退的牢靠。 。。
AAV-DIO-Gs-DREADD注射于Thy1-Cre鼠
2、基于Thy1-Cre工具鼠追踪直接投射到腹侧和背侧海马CA1区的图谱
在Thy1-cre工具鼠的腹侧海马（vCA1）和背侧海马（dCA1）先后注射表达绿色荧光的Helper病毒和表达红色荧光的RV病毒，，，同时熏染2种病毒的起始神经元（starter cell）共标记为黄色[2]。 。。
Thy1-Cre配合AAV helper和RV病毒实现神经元跨单突触标记
3、条件性敲除BIN1改变神经元运动性
使用Thy1-Cre鼠和Bin1flox/flox鼠杂交，，，从而在兴奋性神经元中特异性地敲除Bin1基因。 。。使用c-Fos染色标记运动的神经元数目。 。。效果批注，，，在引入外界刺激的情形下，，，在海马及压后皮层中比照组小鼠的c-Fos阳性细胞数目均显著高于Bin1敲除组。 。。可是在将动物袒露在新情形后，，，Bin1敲除鼠齿状回的c-Fos阳性细胞数目高于比照鼠。 。。以上效果批注，，，在兴奋性神经元中敲除Bin1可以改变神经元的运动[3]。 。。
Thy1-Cre鼠和flox鼠杂交实验条件性敲除目的
锥体神经元加入多种心理历程，，，而Thy1-Cre工具鼠的泛起可实现特异性针对锥体神经元操控，，，是一项主要的适用手艺手段，，，现在，，，UG环球生物已制备成熟的Thy1-Cre小鼠，，，同时，，，为配合Cre鼠的多种应用战略，，，UG环球现推出Cre鼠+AAV病毒打包促销运动：
病毒载体介导的Cre/loxP系统
相较于转基因小鼠，，，借助病毒载体介导的Cre系统实现特异性操作神经元或基因的目的，，，同时可以大大缩短实验的周期，，，另外，，，多种多样的病毒载体，，，可以最大限度的知足种种实验的需求。 。。州病毒载体的特点如下：
Cre-loxp系统的应用
特异性标记/环路示踪
可以借助Cre品系的小鼠和Cre依赖表达的病毒载体连系使用，，，抵达特异性对某些细胞的标记和操控目的。 。。运用神经示踪手艺对大脑特定神经环路的结构和功效举行剖析时，，，亦可以借助Cre重组酶系统和AAV血清型（好比rAAV2/9、rAAV2/retro、rAAV2/1）连系适用，，，抵达特异性对神经环路标记和功效研究的目的。 。。
基于rAAV1-Cre顺行单级跨突触示踪
（Zheng P’s lab., Sci Adv., 2019[4]）
在现实举行实验课题历程中，，，病毒载体辅助和Cre小鼠的配合使用即有互补性，，，又能相互验证，，，成为动物体内研究尤其是神经科学领域研究中不可或缺的助力。 。。
参考文献
[1] Nat Commun. 2016 Oct 21;7:13149.doi: 10.1038/ncomms13149.
[2] Front Neural Circuits. 2021 Apr 14;15:643230.doi: 10.3389/fncir.2021.643230.
[3] PLoS One. 2019 Aug 13;14(8):e0220125.doi: 10.1371/journal.pone.0220125
[4] Sci Adv. 2019 Feb 20;5(2):eaat3210. doi: 10.1126/sciadv.aat3210.
