【on-target】AAV熏染心脏组织 | 血清型·启动子·注射用量 | 一篇就GO了！
?心脏（heart）是动物循环系统中的主要器官，，，，主要功效是推动血液流动，，，，向器官、组织提供富足的血流量，，，，以供应氧和种种营养物质，，，，并带走代谢的终产品，，，，使细胞维持正常的代谢和功效；；；；心脏尚有内渗透功效，，，，其渗透的肽类激素可起到调理血压、尿量及人体内水平衡的作用。。。许多先天性和获得性心脏病的发病机制与心脏的遗传和分子程序的转变亲近相关，，，，关于这类心脏疾病的治疗，，，，基于病毒载体的基因疗法具有很大的治疗远景。。。
心脏结构
重组腺相关病毒载体（recombinant Adeno-associated virus, rAAV）是表达基因序列的理想载体，，，，具有血清型种类多样、免疫原性低、恒久稳固表达基因、宿主规模广等优势，，，，在基因功效研究和基因治疗递送载体中占有主导职位。。。
01 AAV血清型选择
AAV血清型种类多样，，，，由于AAV衣壳卵白结构差别，，，，使其具有差别的组织亲嗜性。。。AAV1、AAV6、AAV8、AAV9等血清型被报道可以高效转导动物心脏，，，，其中AAV9血清型被以为在小鼠心脏基因递送具有更强的优势；；；；AAV6对体外疏散作育的心肌细胞的转导效率更高。。。研究者可凭证实验目的、实验设计去选择合适的病毒载体。。。
差别血清型熏染对心脏转导效率较量（颈静脉注射1周龄小鼠，，，，4周表达效果，，，，PMID: 20703310）
熏染效果图
UG环球生物测试AAV9血清型尾静脉注射熏染心脏效果
心脏主要由心肌细胞（cardiomyocytes, CM）组成，，，，理想的心脏基因疗法载体需要高效转导心肌细胞，，，，心肌也是横纹肌的一种。。。MyoAAV1A血清型可以通过系统注射途径实现高效、特异转导横纹肌。。。
UG环球生物测试MyoAAV1A血清型尾静脉注射熏染横纹肌。。ㄐ募∏衅Ч
UG环球生物可提供AAV1-9、MyoAAV1A等几十种AAV血清型病毒包装效劳。。。
02 启动子选择
心脏中的主要细胞类型为心肌细胞（cardiomyocytes, CM），，，，别的还包括成纤维细胞(fibroblasts, FB)，，，，内皮细胞(endothelial cells, EC)，，，，周细胞(pericytes, PC)，，，，免疫细胞( immune），，，，脂肪细胞(adipocytes, Adip)和神经元(neuronal cells, NC)等。。。因此，，，，在心脏基因递送时高效特异地靶向心肌细胞尤为主要，，，，现在，，，，关于心肌细胞的特异性熏染可以借助心肌细胞特异性启动子—肌钙卵白，，，，cardiac troponin T实现。。。
UG环球生物测试肌钙卵白启动子尾静脉注射熏染心肌细胞效果
UG环球生物可提供CBh、CAG、CMV、EF1a等普遍表达启动子，，，，亦可提供靶向心肌细胞的肌钙卵白特异性启动子，，，，资助您构建高效、特异性靶向心脏的rAAV载体。。。
03 注射方法及注射剂量
靶向心脏的基因递送方法包括心肌定点注射、静脉注射、冠状动脉注射、皮下注射等，，，，现在针对小鼠心脏基因递送常用的注射方法主要为心肌定点注射和尾静脉注射。。。
几种常见注射方法较量
表中注射用量为成年小鼠注射剂量。。。
基于rAAV载体的心脏基因递送方法（PMID: 21792180）。。。(a) 静脉注射（Systemic venous delivery）；；；；(b)冠状动脉注射（coronary delivery）；；；；(c)心肌定点注射（Intramyocardial delivery）
注射操作视频请点击文末阅读原文。。。
04 应用案例
借助rAAV载体携带肌钙卵白启动子通过尾静脉注射可特异性熏染心肌细胞，，，，展现了LPA3介导的LPA信号通路对早期心肌细胞增殖调控的作用机制。。。（详情请点击中国医学科学院阜外医院胡盛寿院士/陈曦教授团队展现LPA3介导的溶血磷脂酸信号通路增进小鼠出生后心脏再生）
AAV熏染心脏（PMID: 35673578）
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病毒产品 |
AAV9-肌钙卵白-3Flag-LPA3 |
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实验动物 |
新生鼠、成年鼠 |
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注射方法 |
背部皮下注射-新生鼠；；；；心肌定点-成年鼠 |
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熏染部位 |
心脏 |
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病毒用量 |
1E+11vg，，，，10 μL-新生鼠；；；；20μL-成年鼠 |
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检测时间 |
＞2周 |
借助rAAV-DIO载体配合Col1a2-CreERT鼠通过颈静脉注射可熏染心脏成纤维细胞，，，，实现对心脏病的机制研究。。。
AAV熏染心脏（PMID: 35673578）
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病毒产品 |
pAAV-CGB-DIO-Wnt4-miR30shRNA-WPRE,pAAV-CMV-DIO-Wnt4-3xFLAG-WPRE |
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实验动物 |
Col1a2-CreERT鼠 |
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注射方法 |
颈静脉注射 |
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熏染部位 |
心脏 |
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病毒用量 |
100 μL，，，，1E+11vg |
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检测时间 |
＞2周 |
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参考文献
[1] PMID: 32146862
[2] PMID: 20703310
[3] PMID: 21792180
[4] PMID: 34076247
[5] PMID: 33042260
[6] PMID: 35673578
[7] PMID: 28169951
[8] PMID: 28726495
[9] PMID: 32379579
[10] DOI：https://doi.org/10.1038/s41586-020-2797-4
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