常用载体元件先容及病毒载体应用
启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，，，，能活化RNA聚合酶，，，，使之与模板DNA准确的连系并具有转录起始的特异性。。 。。。
启动子主要分为广谱启动子和特异性启动子。。 。。。广谱启动子为在种种组织、细胞上普遍表达的启动子 ；；；；；特异性启动子为在特异性组织或者细胞类型上表达的启动子。。 。。。常用广谱启动子有CAG，，，，CMV，，，，EF1a，，，，PGK等，，，，还包括启动RNA的III型启动子U6和H1启动子 ；；；；；常用特异性启动子如成熟神经元特异性启动子hSyn，，，，投射神经元特异性启动子CaMKIIa，，，，星型胶质细胞特异性启动子GfaABC1D，，，，心肌特异性启动子cTNT，，，，肝实质细胞特异性启动子TBG等。。 。。。
(2) 荧光：
针对编码卵白，，，，通例推荐目的基因和荧光卵白非融合表达，，，，通过荧光视察熏染效率。。 。。。若需要用荧光标记目的基因的位置，，，，如亚细胞定位等实验时可思量做目的基因和荧光卵白融合表达。。 。。。因卵白均有自己的空间结构，，，，若选择融合表达，，，，两个卵白可能会相互影响。。 。。。
抗性筛选的浓度可通过空细胞抗性预实验确认，，，，浓度梯度可凭证抗生素说明书推荐浓度规模设置。。 。。。
(4)卵白标签：
卵白标签（protein tag）：与目的卵白一起融合表达的一种多肽或者卵白，，，，以便于目的卵白的表达、检测、示踪和纯化等。。 。。。常见标签：3xFLAG，，，，6xHis，，，，HA，，，，Myc ，，，，OLLAS，，，，GST等。。 。。。需注重目的卵白是否有功效肽如信号肽，，，，前肽等，，，，卵白标签需要融合无功效肽的一端。。 。。。
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(5) 其他：
自剪切多肽2A(self-cleaving 2A peptide,2A) ：平均长度为18-22个氨基酸，，，，2A上下游的基因同时转录，，，，同时翻译，，，，翻译后的肽段在2A的最后一个脯氨酸断开，，，，最终划分获得一个融合有2A肽尾巴的上游卵白和一个N端带有一个脯氨酸的下游卵白。。 。。。
优点：2A 肽结构短小并且上下游基因的表达平衡性好 ；；；；；
弱点：差别基因差别细胞中2A断裂效率有所差别。。 。。。
内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)：IRES元件具有不依赖帽子结构而自力召募核糖体的功效进而可以启动下游基因的翻译。。 。。。处在IRES元件上下游的两个基因同时转录，，，，自力翻译，，，，最终获得两个自力的卵白。。 。。。
优点：自力翻译,进而可以表达获得完整的目的卵白 ；；；；；
弱点：IRES的结构较大,其应用常受到载体容量的限制,并且IRES对下游基因翻译起始能力相对较弱，，，，因此经常为包管目的基因的表达，，，，将荧光卵白放在IRES下游，，，，可能会导致荧光偏弱。。 。。。
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